Proteine

in prokaryotischen E. coli, im eukaryotischen Baculovirus-Insektenzellen-Expressionssystem, Sf9, sowie in Hefen und Säugetierzellen. Das dabei erhaltene Protein wird gereinigt und zur Immunisierung der Host-Tiere verwendet. Optional: Tag removal, sofern dies mit guter/ oher Ausbeute durchführbar ist. Gensynthese Die Geschichte zur Herstellung von synthetischen Genen nahm ihren Anfang als Khorana et al. , 1972 sie zur Synthese eines tRNA-Gens eingesetzt hatte. Nachfolgend wurden eine Reihe von Verfahren publiziert, die sich mit Genynthese im weitesten Sinne beschäftigen. Üblicherweise werden bei gängigen Syntheseverfahren die jeweiligen Gene oder Genabschnitte in kurze einzelsträngige, sich überlappende Oligonukleotide aufgeteilt, welche mittels automatischer Festphasensynthese hergestellt werden. Diese Oligonukleotide müssen anschließend gereinigt und zu den jeweiligen größeren Fragmenten mit Hilfe von DNA-Ligasen und DNA-Polymerasen assembliert werden. Dabei entstehen zunächst Subfragmente, die ihrerseits über spezifische Überhänge in der richtigen Reihenfolge über Ligation miteinander verknüpft werden. Die Richtigkeit der Sequenz wird anschließend durch DNA-Sequenzierung überprüft.