OECD 442C, OECD 442D, OECD 442E Hautsensibilisierung Gefährdungsbeurteilung in vitro / in vitro Test - INVITRO-CONNECT GmbH
Hautsensibilisierung / in vitro Test:
DPRA, OECD 442C, OECD 442D, h-CLAT, OECD 442E, kDPRA, SENS-IS®, usw.
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in vitro Hautsensibilisierungstests:
Die Bestimmung des Potenzials zur Hautsensibilisierung ist ein kritischer toxikologischer Endpunkt in der Sicherheitsbewertung neuer Chemikalien. Obwohl der Maximierungstest an Meerschweinchen (GPMT) und der in vivo lokale Lymphknoten-Test (LLNA) traditionell zur Bewertung der Hautsensibilisierung verwendet wurden, hat sich die jüngste Aktivität auf die Entwicklung neuartiger tierversuchsfreier Tests für diesen Endpunkt konzentriert.
Direkter Peptidreaktivitätsaktivierungstest (DPRA, OECD 442C):
Der DPRA (OECD 442C) ist ein in chemico-Test, der das erste Schlüssereignis im Adverse Outcome Pathway (AOP) der Hautsensibilisierung modelliert – Haut, Proteinreaktivität.
Verbindungen, die mit allergischer Kontaktdermatitis (ACD) in Verbindung gebracht werden, sind in der Regel elektrophil. Dieser Test identifiziert dermale Sensibilisierer basierend auf ihrer Reaktivität mit synthetischen Peptiden, die die nukleophilen Aminosäurereste Lysin und Cystein enthalten. Mit LC/UV kann die Konjugation des Testmaterials mit den Peptiden analysiert werden.
ARE-Nrf2-Luziferase-Keratinocyten-Aktivierungstestmethode (OECD 442D):
KeratinoSensTM und LuSens sind zellbasierte Reporter-Gen-Tests, die das zweite Schlüssereignis im Adverse Outcome Pathway für dermale Sensibilisierung modellieren, nämlich die Aktivierung von Keratinozyten. Die Tests messen die Induktion eines stabil transfizierten Luziferase-Gens unter der Kontrolle des Antioxidans-Reaktions-Elements (ARE), das vom menschlichen AKR1C2- oder Ratten-NQO1-Gen abgeleitet ist.
Human Cell Line Activation Test (h-CLAT, OECD 442E):
Der Human Cell Line Activation Test (h-CLAT) ist ein zellbasierter Test, der Hautsensibilisierer identifiziert, indem Veränderungen in der Expression von Zelloberflächenmarkern (CD54 und CD86) untersucht werden, die an der Aktivierung von dendritischen Zellen beteiligt sind, dem dritten Schlüssereignis des AOP zur Hautsensibilisierung. Nach der Exposition der THP-1-Menschenmonozytenzelllinie gegenüber der Testsubstanz werden die Expressionsniveaus von CD54 und CD86 durch Durchflusszytometrie quantifiziert und mit Kontrollen verglichen.
Kinetischer direkter Peptidreaktivitäts-Test (kDPRA):
Aufbauend auf dem ursprünglichen DPRA (OECD TG 442C) bewertet dieser Test mehrere Substanzkonzentrationen und Zeitpunkte, um quantitative Reaktionsdaten bereitzustellen. Diese Informationen können bei der Bestimmung der Potenz helfen und haben das Potenzial, Substanzen in die UN GHS-Unterkategorien 1A und 1B einzuordnen.
Ähnlich wie der DPRA-Test untersucht kDPRA die Reaktivität von Testmaterialien mit nukleophilen Peptiden. Hohe Konjugationsniveaus sind ein Indikator für einen potenziellen Sensibilisierer.
SENS-IS®:
Als Test der nächsten Generation verwendet SENS-IS ein rekonstruiertes menschliches Epidermis-Modell (RhE) und untersucht Veränderungen in der Genexpression von 65 Markern, die mit der epidermalen Reaktion auf reine Verbindungen und Formulierungen verbunden sind. Das RhE-Modell bietet mehrere Merkmale, die in monolayer-basierten Tests nicht dargestellt sind, einschließlich der Barriereeigenschaften der Hornhaut, der metabolischen Aktivierung/Dekativierung von Substanzen und einer besseren Verträglichkeit mit unlöslichen Verbindungen und Formulierungen.
Integrierte Teststrategien zur Hautsensibilisierung:
Die Bestimmung des Potenzials zur Hautsensibilisierung ist ein kritischer Endpunkt in der Sicherheitsbewertung von Rohstoffen, Chemikalien, Mischungen und Formulierungen. Obwohl der Maximierungstest an Meerschweinchen (GPMT) und der lokale Lymphknoten-Test (LLNA) historisch verwendet wurden, um diesen unerwünschten Effekt zu adressieren, wurden in vitro-Tests entwickelt und validiert, um diese ressourcenintensiven Tierversuche zu ersetzen.
Hautsensibilisierung ist das Ergebnis einer Reihe biochemischer „Schlüsselerereignisse“ (KEs), die die kovalente Bindung von (in der Regel elektrophilen) Verbindungen an zelluläre Proteine (KE1), die Aktivierung verschiedener Wege innerhalb von Hautzellen (KE2) und die Sensibilisierung des Immunsystems (KE3) umfassen, was zu einer allergischen Reaktion bei wiederholter Exposition gegenüber der Substanz führt.